السيتوكينات وقياسها باستخدام تقنية “إليزا” (ELISA)

تحضين العينة: تُضاف العينة البيولوجية (مثل المصل أو البلازما) إلى الآبار المبطنة بالأجسام المضادة، مما يسمح للسيتوكينات الموجودة في العينة بالارتباط بسطح البئر.

الغسل: لإزالة أي ارتباط غير نوعي، تُغسل الآبار باستخدام محلول الغسل الخاص بشركة “كارمانيا بارس جين” (Karmania Pars Gene).

إضافة الجسم المضاد الموسوم بالبيوتين (الجسم المضاد للكشف): يُضاف جسم مضاد ثانوي مقترن بالبيوتين إلى الآبار ليتفاعل مع السيتوكين المرتبط.

غسل إضافي: تُغسل الآبار لإزالة الأجسام المضادة الموسومة المرتبطة بشكل غير نوعي.

إضافة HRP-Avidin: يُضاف جزيء HRP مقترن بالأفيدين (avidin) إلى الآبار ليرتبط بالجسم المضاد الموسوم بالبيوتين.

إضافة الركيزة: تُضاف ركيزة (TMB) إلى الآبار؛ حيث تتفاعل مع إنزيم HRP لتوليد لون.

إضافة محلول الإيقاف: يُضاف حمض (H2SO4) إلى الآبار لإيقاف تفاعل إنزيم HRP، وتغيير اللون من الأزرق إلى الأصفر عن طريق تعديل درجة الحموضة (pH).

قياس الامتصاصية: تُقاس شدة اللون المتكون باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة (microplate reader) عند طول موجي قدره 450 نانومتر، مما يعكس تركيز السيتوكين في العينة.

تُعرف هذه الطريقة باسم “طريقة الساندويتش” (Sandwich method).

اختبار “ساندويتش” إليزا (Sandwich ELISA): تعتمد هذه الطريقة على مجموعتين من الأجسام المضادة للكشف عن السيتوكينات؛ حيث تُستخدم مجموعة لتغطية سطح الصفيحة، بينما تُستخدم المجموعة الأخرى للكشف.

التطبيقات السريرية والبحثية: يُستخدم قياس السيتوكينات على نطاق واسع في الأبحاث، كما يحظى بأهمية سريرية لتقييم مستويات السيتوكينات الرئيسية، مثل عامل نخر الورم ألفا (TNF-alpha) والإنترلوكين-6 (IL-6).